细胞内细胞因子的流式细胞仪检测 一、简介 随着研究的进展，仅仅对细胞进行定量和活性的检测已不能满足需要。在单细胞水平研究细胞因子的表达能力对研究细胞因子在疾病中的作用越来越显的重要无比。目前检测单个细胞特定细胞因子的表达手段包括：ELIspot、原位杂交、免疫细胞化学、限制性稀释分析（limiting dilution analysis，LDA）和单细胞PCR，应用原位杂交技术和免疫组化方法观察细胞因子蛋白表达及 mRNA 表达可以识别 Th1 和 Th2 细胞，此方法可获得较强的细胞内信号，但此方法工作量大、主观性强，难以进行大样本检测，且人肉眼识别能力有很大的局限性，而ELISPOT 及单细胞PCR 技术，技术性强、劳动强度大，难以进行广泛推广。随着多标记及胞内细胞因子标记流式细胞技术的出现，使对细胞内细胞因子的研究推向了一个新的阶段。下面主要对胞内细胞因子流式细胞技术作以介绍。 早期细胞因子表达与细胞功能相关性研究是基于特定克隆细胞的激活。尽管研究应用 T淋巴细胞克隆证明了不同细胞因子的合成，如TH1(IL－2，IFN－)与TH2(IL－4，IL－5，IL－10)，但这 些 研究很难外 推，因为 T 细胞克隆与体 内T 细胞功能相关性还 未 被 揭 示 。 近 来，Jung 与Picker 采 用了monensin、PMA 等 药 物 预 孵 ，用 Brefeldin(BFA)、Monensin阻 断 了胞内高 尔 基体 介导 的转 运 的方法使得细胞因子聚 集 ，蓄 积 ，增 强细胞因子信号可被 流式细胞仪检测。因为 自 然 状 态 下，T 淋巴细胞产 生 少 量的细胞因子，通 常 要对 T 淋巴细胞体外 活化进行研究。在体 外 刺 激过 程 中，T 淋巴细胞产 生 的细胞因子已释放 出来，胞内细胞因子信号较弱 ，难以进行检测。这 一方法可检测单个细胞内多个细胞因子，并 可区 分表达特定细胞因子的细胞亚 群 。在细胞水平该 方法证明了人与鼠 的淋巴细胞都 存 在 1 型 与2 型 分化，且这 些 分化在特定细胞因子增 强时 可被 逆 转 。且这 些 研究清 楚 地 证明，只 有激活的细胞亚 群可以表达细胞因子，静 止 的正 常 淋巴细胞(T、B、NK)不能分泌 细胞因子。 胞内流式分析法是用抗 细胞因子抗 体 与细胞表面或 胞内特定亚 群 标志 组合，即 可检测不同细胞亚 群 细胞因子的分泌 ，同时 采 用特殊 的化学与抗 体 选 择 ，确 保 静 止 与无细胞因子分泌 细胞的最 小 荧 ...
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