大肠杆菌发酵经验总结大肠杆菌发酵经验总结首先,补料速率与比生长速率直接影响着乙酸的生成速率和积累量〔主要是补料速率与比生 长速率影响发酵液中的残糖量,进而影响〕,所以适当的限制补料速率和比生长速率,对于 限制乙酸的量有很好的效果.其次,必须要保证充足的溶氧,并严格限制 pH 值,而且补酸碱的速率尽量缓和,不能太快； 温度对于蛋白的表达也有很重要的影响,较低的发酵温度下所生产出的蛋白大多是有活性 的,而较高的发酵温度下产生的蛋白大多一包涵体形式存在.第三,选取合理的诱导时间非常重要,一般的诱导时间选在指数生长后期,而且诱导时的比 生长速率最好能限制在之内,选在此时诱导,1.将菌体的快速生长期与蛋白合成期分开,使 这两个阶段互不影响,有利于蛋白的高表达；2.已经得到了大量的菌体,而且菌体的生物量 根本接近稳定,不管是从动力学角度,还是能耗,物料本钱方面,都比拟合理.第四,补料过程中的碳氮比也很重要.假设氮源过高,会使菌体生长过于旺盛,pH 偏高,不 利于代谢产物的积累,氮源缺乏,那么菌体繁殖量少从而影响产量;碳源过多,那么容易刑场较 低的 pH,抑制菌体生长,碳源缺乏,那么容易引起菌体的衰老和自溶.另外,碳氮比不当还 会引起菌体按比例的吸收营养物质,从而直接影响菌体的生长和产物的合成.根据自己的经验,一般情况下,对于一个稳定的发酵工艺下,如果总是在固定的发酵时间段 出现溶菌现象,而且能排除噬菌体和染菌的可能性后,那就可能是由于碳氮比不合理造成的. 可以适当调整碳氮比.大家讨论得较多的是关于代谢副产物乙酸对大肠杆菌发酵的影响,现总结以下几点,并作出 相应解决举措.一、代谢副产物-乙酸乙酸是大肠杆菌发酵过程中的代谢副产物,在多大的浓度下产生抑制作用各种说法不一,一 般认为在好气性条件下,5〜10g/L 的乙酸浓度就能对滞后期、最大比生长速率、菌体浓度以及最后蛋白收率等都产生可观测到的抑制作用.当乙酸浓度大于 10 或 20g/L 时,细胞将会停止生长,当培养液中乙酸浓度大于 12g/L 后外源蛋白的表达完全被抑制.预防乙酸产生的举措：1、通过限制比生长速率来减少乙酸的产生：比生长速率越高,乙酸产生越多,当比生长速率超过某个值时,乙酸开始产生.可以通过降 低温度,调节酸碱度,限制补料等方法来降低比生长速率.2、透析培养：在大肠杆菌的培养过程中可以用透析技术除去发酵液中的有害物质,降低乙酸含量从而实现 重组菌的高密度发酵和产物的表达.3、限制葡萄糖的浓度：葡萄糖是大肠杆菌...
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