一、组织总 RNA的提取相关试剂： Trizol；氯仿；苯酚；异丙醇； 75%乙醇； RNase-free 水相关仪器： 制冰机；液氮 &研钵/ 生物样品研磨仪；高速离心机；移液器（1ml、200μ l 、100μ l /50 μ l ）；涡旋振荡仪；恒温金属浴。相关耗材： 解剖工具，冰盒，离心管，离心管架，吸头（1ml，200μ l /300 μ l ），一次性手套，实验手套。实验步骤1. 取暂养草鱼，冰上放置一段时间，然后解剖，剪取肠道50~100mg，放入研钵中，加入液氮迅速研磨， 然后加入 1ml 预冷 TRIzol 试剂，充分研磨至无颗粒物存在。2. 转移到离心管中，室温放置5min，使细胞充分裂解；3. 按 1ml Trizol加入 200μ l 氯仿，盖上盖子，迅速充分摇匀15s，然后室温放置3min；4. 4℃， ,12000g 离心 15min；此时混合物分为三层，下层红色的苯酚氯仿层，中间层和上层无色水相；RNA存在于无色水相中；5. 小心吸取上清液， 千万不要吸取中间界面，否则有 DNA污染； 转移至一个新的离心管，加入等体积的异丙醇，轻轻混匀；6. 室温放置 10min；4℃， ,12000g 离心 10min；7. 弃上清，加入1ml 75%乙醇洗涤；涡旋，悬浮沉淀；4℃， ,12000g 离心 5min；8. 弃上清；可以再次用75%乙醇洗涤沉淀；9. 弃上清； 用移液器轻轻吸取管壁或管底的残余乙醇，注意不要吸取沉淀； 室温放置 5min 晾干沉淀；（RNA样品不要过于干燥，否则极难溶解）10. 沉淀中加入 30μ l RNase-free水，轻弹管壁，使RNA溶解。RNA质量检测相关试剂： 溴酚蓝， TEB/TAE电泳缓冲液，溴乙锭（ EB）相关仪器：（超微量分光光度计，移液器（ 2.5 μ l 或 2μ l 规格，10μ l 规格），电子天平，电泳仪，电泳槽，凝胶成像仪，微波炉，制冰机）相关耗材：（无菌无绒纸，吸头，离心管架，PCR管， PCR管架，锥形瓶，烧杯，一次性手套，实验手套，冰盒）（1）RNA纯度的检测：测定其OD260 和 OD280 的值，根据其OD260/ OD280 的比值，当其比值在 1.9~2.1 之间，说明提取的总RNA纯度比较高，没有蛋白质和基因组的污染。（2）RNA完整性的检测：取2μ lRNA，与 2μ l 溴酚蓝混匀，用1%的琼脂糖进行凝胶电泳， 20min 后，在凝胶成像系统中观察效果。当28S 与 18S 条带清晰，且亮度比大约是 2:1 时， 5S条带若隐若现，而且没有其它条带时，说明完整性不错，可以用于下游逆转录实验。二、逆转录（ RNA逆转录成 cDNA）相关仪器：（PCR仪/ ...
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