分子诊断在结核病诊治中分子诊断在结核病诊治中的应用（要点）的应用（要点）结核病是严重威胁人类健康的结核病是严重威胁人类健康的重大传染性疾病。近年来结核病“死灰复重大传染性疾病。近年来结核病“死灰复燃”及临床耐药显著增多，加之非结核分燃”及临床耐药显著增多，加之非结核分支杆菌（支杆菌（NTMNTM）感染率不断增加，使得）感染率不断增加，使得结核病的诊断更加困难。结核病的诊断更加困难。目前，诊断结核分支杆菌（目前，诊断结核分支杆菌（MTBMTB））的金标准仍然是结核杆菌培养，尤其是药敏试验的金标准仍然是结核杆菌培养，尤其是药敏试验结果在指导临床用药及耐药性监测等方面具有重结果在指导临床用药及耐药性监测等方面具有重要作用。要作用。但是，结核杆菌培养阳性率低费时费但是，结核杆菌培养阳性率低费时费力，难以满足临床要求。力，难以满足临床要求。分子诊断因具有快速、特异、灵敏度分子诊断因具有快速、特异、灵敏度高的优点，从而使快速诊断结核病成为可能，尤高的优点，从而使快速诊断结核病成为可能，尤其是对结核分枝杆菌耐药基因的监测，为结核病其是对结核分枝杆菌耐药基因的监测，为结核病的治疗提供了重要指导意义。的治疗提供了重要指导意义。提要提要结核病分子诊断项目及临床意义结核病分子诊断项目及临床意义11、体外、体外γγ干扰素释放试验干扰素释放试验22、结核分枝杆菌、结核分枝杆菌DNADNA定量检测定量检测33、耐药基因检测、耐药基因检测结核病分子诊断使用范围结核病分子诊断使用范围11、体外、体外γγ干扰素释放试验干扰素释放试验体外体外γγ干扰素（干扰素（IFNIFN）释放试验）释放试验又称又称TT细胞斑点检测试验（细胞斑点检测试验（T-spotT-spot），是近），是近年来发展起来的检测年来发展起来的检测抗原特异性抗原特异性TT细胞细胞技术，技术，为目前最敏感的检测为目前最敏感的检测抗原特异性抗原特异性TT细胞细胞的方法的方法之一。之一。通过检测结核感染后，通过检测结核感染后，TT淋巴细胞淋巴细胞分泌的特异性细胞因子分泌的特异性细胞因子IFN-γIFN-γ，来检测是否，来检测是否存在结核感染。存在结核感染。T-spot.TBT-spot.TB的原理的原理结核分枝杆菌感染机体后被巨噬细胞吞噬，但结核分枝杆菌感染机体后被巨噬细胞吞噬，但不能完全将其清除，巨噬细胞凋亡后释放出大不能完全将其清除，巨噬细胞凋亡后释放出大量特异性抗原，并递呈给特异性的量特异性抗原，并递呈给特异性的CD4CD4、、CD8TCD8T细胞，使其激活并释放大量细胞，使其激活并释放大量γ-γ-干扰素。干扰素。大量研究表明，结核抗原特异性分泌大量研究表明，结核抗原特异性分泌γ-γ-干扰素干扰素的的TT细胞可作为结核分枝杆菌感染的一种可靠细胞可作为结核分枝杆菌感染的一种可靠标志物。标志物。外周血外周血T-SpotT-Spot即利用酶联免疫斑点技术即利用酶联免疫斑点技术（（ELISPOTELISPOT）通过检测结核分枝杆菌特异）通过检测结核分枝杆菌特异性抗原刺激后外周血单个核细胞释放的性抗原刺激后外周血单个核细胞释放的γ-γ-干干扰素，来检测扰素，来检测抗原特异性Ｔ淋巴细胞抗原特异性Ｔ淋巴细胞的应答反的应答反应，从而判断结核感染状态。应，从而判断结核感染状态。每一个斑点代表一个分泌细胞因子的每一个斑点代表一个分泌细胞因子的TT细胞，细胞，记数斑点数量可以获得外周血中记数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的结核致敏的TT细胞细胞数量。数量。方法：方法：用用培养滤过蛋白培养滤过蛋白1010（（CFP-CFP-1010）和）和早期分泌靶向抗原蛋白早期分泌靶向抗原蛋白66（（ESAT-6ESAT-6）两种）两种TBTB特异性抗原，刺特异性抗原，刺激外周血激外周血单个核细胞单个核细胞（（PBMCsPBMCs），检测），检测PBMCsPBMCs经特异性抗原刺激后是否释放经特异性抗原刺激后是否释放IFN-γIFN-γ，以抗体捕获，以抗体捕获IFN-γIFN-γ，经酶联斑点，经酶联斑点显色后，通过显色后，通过T-spotT-spot分析系统对斑点进行分析系统对斑点进行计数。计数。结果判读结果判读试验分四组：空白对照组、抗原组试验分四组：空白对照组、抗...
