[ 教学 ]MDCK细胞培养技术孔板底面积 9.6cm2, 加培养液的量 2.5ml, 培养液的量 2ml, 12 孔板底面积 4.5cm2, 加24 孔板底面积 2cm2,加培养液的量 1ml, 96 孔板底面积 0.32cm2, 加培养液的量 0.1ml, 24 孔板底面积 2cm2,一般加培养液的量1ml, 在接种病毒的时候一般病毒用量为添加培养液的 5%-20%。在做咽拭子标本时应视标本的采集质量而定，如果标本采集质量高可以少加一些，如0.2ml-0.5ml,如果标本采集的不够好，则应相对加大标本接种量，可以加到1ml. 附件 1: GIBCO BRL Cat. # EDTA 处理胰酶 15400 GIBCO BRL Cat. # HEPES 缓冲液 1 M 母液 15630-080 GIBCO BRL Cat. # D-MEM培养基 11965-092 GIBCO BRL Cat. # 青、链霉素母液 10,000 U/ml 15140-122/100ml GIBCO BRL Cat. # 牛血清白蛋白组分 V 7.5%溶液 5260-037/100ml 三、 MDCK细胞培养技术( 一) 生物安全级别和生物安全规定1. MDCK细胞培养实验室生物安全级别: 正常 MDCK细胞培养在生物安全二级实验室进行。2. MDCK细胞培养实验室生物安全规定: 遵守生物安全实验室相应的生物安全规定。( 二)MDCK细胞的传代培养步骤1. 细胞培养所需的材料 ( 部分试剂在此列出生产厂家货号仅供参考，可自行选择 ): (1) 生长成片的 MDCK细胞; (2) T-75细胞培养瓶 , 颈口有倾角 ; (3) D-MEM 培养液 ; (4) 青、链霉素母液 (10,000U/mL 青霉素 G;10,000 μ g/mL硫酸链霉素 ) ，分装后保存于 -20?; (5) HEPES 缓冲液， 1M母液 ; (6) 胎牛血清 ; (7) EDTA- 胰酶 (0.05, 胰酶;0.53mMEDTA?4Na)(Gibco CatNo. 25300-062) ，分装后保存于 -20?; (8) 牛血清白蛋白组分V，7.5, 溶液 (GIBCO CatNo. 15260); (9) 1mL 和 10mL无菌移液管等 ; (10) 70,,75,的酒精。建议 : 经常检查试剂使用的有效期和MDCK细胞的代数。2. 培养基和试剂的准备 : (1) 500mL 的 D-MEM液中加入a) 青、链霉素母液 5mL(终浓度达 :100U/mL 青霉素和 100μ g/mL链霉素 ); b) HEPES缓冲液 12.5mL(终浓度 :25mM); c) 7.5,牛血清白蛋白组分V12.5mL。d) 加入 7.5%NaHCO10-15mL(终浓度 :2-3%) 3 (2) 细胞生长液10mL胎牛血清加到 90mL的上述 D-MEM液，使胎牛血清的终浓度为10, 。每批胎牛血清均应进行血清测试，通过测试确定血清的最佳使用浓度。此处提到的血清使用浓度只是一个参考浓度...
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