【一、提 RNA】一、实验准备：1、试剂： 75%乙醇、 Trizol、1.5mL 进口 EP管、氯仿、异丙醇、进口枪头(RNA专用 ) 、2、配 75%乙醇 (DEPC水+无水乙醇 ) ，放 -20 ℃冰箱预冷；3、预冷离心机 (1.5mL EP 管用的 ) ；4、清洁桌面，酒精喷过之后擦干，新手套、两层口罩；二、操作步骤：01、弃上清（不回收，直接倒去）；02、 1mL/孔 PBS 洗两遍（不回收，直接倒去，随后用200μ L 枪吸尽 PBS）；03、每孔加 500μ L Trizol，轻晃，随后室温放置2min 左右；04、枪头吹打，吸出放入1.5mL 进口 EP管；05、加入 100μ L 氯仿 ( 即 1/5 体积的 trizol)；06、 4℃离心机， 12000g， 15min；07、吸 200μ L( 可减少 ) 上清放入新的1.5mL 进口 EP管中（注意：只能吸到上清）；08、加入等体积异丙醇，充分混匀，常温放置10-30min(15min)；09、 4℃离心机， 12000g， 10min；10、倒掉液体，加入1mL预冷的 75%乙醇剧烈混匀；11、 4℃离心机， 7500g，5min；12、倒掉上清，加入1mL预冷的 75%乙醇，混匀；13、 4℃离心机， 7500g，5min；14、倒掉上清，倒扣在餐巾纸上，5-10min ，用针头或者200 微升枪头去掉管壁上的水珠；15、每管中加入40μ L(40 μ -60 μ L) 的 DEPC水，吹打溶解；16、测浓度（先知楼21 楼测 RNA浓度，带 DEPC水、灭菌的dd 水、 10 微升枪和枪头）；三、注意事项01、如果当时不测RNA浓度，可暂时把RNA放在 -20 ℃冰箱。但长时间(>24h) 保存，需要放在-80 ℃冰箱；02、异丙醇作用是沉淀RNA，作用比乙醇好；03、04、05、06、07、08、09、【二、测 RNA浓度】一、实验准备：01、先知楼21 楼-2109 教室，一个冰盒+DEPC水+10 微升枪、灭菌dd H 2O、10μ L 枪头 (RNA专用 ) 、本子 +笔；二、操作步骤：01、登记；02、打开电脑 ==>打开“ N”软件 ==>点击“ Nucleic acid”==>选择“ OK”==>选择“ RNA”；03、灭菌 dd H 2O清洗 2-3 遍，擦干；04、 DEPC水 校零：即加DEPC水一滴，点击“Blank ”，擦干；05、测 RNA：加样品一滴，点击“measure”，擦干，随后加下一个样品；06、记录数据，包括RNA浓度（ <1000ng/ μ L）、 260/280 ；07、灭菌 dd H 2O清洗 2-3 遍，擦干；08、 -80 ℃冰箱 保存；三、注意事项230nm代表有机物水平( 碳水化合物 ) ，260nm代表 RNA 水平，280nm 代表蛋白水平， 260/230表示有机物量，260/280...
VIP
