土壤中产淀粉酶菌株的分离、纯化与鉴定及高活力淀粉酶菌株的筛选 组数：第一组 组员：王臣东 李长花 张晓晶 杨明明 1 实验目的 1 .1 掌握土壤中分离产淀粉酶菌株的方法。 1 .2 进一步掌握和熟练无菌操作技术。 1 .3 掌握分离纯化微生物的方法。 1 .4 掌握从环境中采集样品并从中分离纯化某种微生物的完整操作步骤。 1 .5 巩固以前学的微生物学实验技术。 1 .6 学习淀粉酶活性的测定方法。 2 实验原理 α-淀粉酶是一种液化型淀粉酶，它的产生菌芽孢杆菌，广泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉类物质的土壤等样品中。淀粉酶是能够催化淀粉水解，转化成葡萄糖的、麦芽糖及其他低聚糖的一类酶的总称。从淀粉厂周围采集土壤样品，采用稀释法制备土壤稀释液，涂布于营养琼脂培养基平板上培养 1 天，在平板上滴加碘液，可产生淀粉酶的菌株水解淀粉遇碘不变蓝，在培养基表面形成透明圈。然后挑取可产生透明圈的菌株在平板划线培养 2 -3 次，得到纯化的菌株，再测其酶活力大小。 分离得到纯种这只是选种工作的第一步。所分得的纯种是否具有生产上所要求的性能，还必须要进行性能测定后才能决定取舍。性能测定的方法分初筛和复筛两种。 初筛一般在培养皿上根据选择性培养基的原理进行。例如要测定淀粉酶的活力可以把斜面上各个菌株一一点种在含有淀粉的培养基表面，经过培养后测定透明圈与菌落直径的比值大小来衡量淀粉酶活力的高低。 复筛是在初筛的基础上做比较精细的测定。一般是将微生物培养在三角瓶中作摇瓶培养，然后对培养液进行分析测定。在摇瓶培养中，微生物得到充分的空气，在 培养液中分布均匀，因此和发酵罐的条件比较接近，这样，测得的结果更具有实际的意义。 3 实验器材 3.1 样品：土样（甘肃昆仑生化公司周围采集的土样若干） 3.2 培养基 3.2.1 平板培养基：蛋白胨 10g、牛肉膏 3g、氯化钠 5g、可溶性淀粉 2g、琼脂 15-20g、 自来水 1000m l 3.2.2 斜面培养基：同 3.2.1 3.2.3 液体培养基：蛋白胨 10g、牛肉膏 3g、氯化钠 5g、自来水 1000m l 3.3 器材：30 个 90 培养皿、酒精灯、接种环、14 个试管、5 个三角瓶（250m l）、涂布棒、移液管、恒温水浴锅、恒温培养箱、高压灭菌锅、超净工作台 3.4 试剂 3.4.1 淀粉酶活力测定：碘液 3.4.2 革兰氏染色：草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇 3.4.3 2%淀粉溶液：2 克淀粉加入少量热水使其溶解，再加入热水...
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