总黄酮的测定方法黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物, 种类繁多 , 大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷, 部分为游离态或与鞣质结合存在。黄酮化合物系色原烷或色原酮的2- 或 3- 苯基衍生物 , 一般具有 C6-C3-C6 的基本骨架结构。 近年来 , 黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐, 人们对含有黄酮的化合物进行大量研究, 以期获得黄酮含量较高的中草药。因此黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。一、方法（一）高效液相色谱法1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器 360nm 条件下，以保留时间定性、峰面积定量。2．仪器和试剂 （1）高效液相色谱仪（ 2）紫外检测器（3）层析柱 （4）超声波清洗仪（ 5）索氏提取器（6）微孔过滤器（滤膜0.45um） （7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品（9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。 （10）去离子水（11）芦丁标准溶液： 精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至 100ml，配成 150ug／ml 的芦丁标准溶液3. 操作步骤（1）样品处理1）固体样品：称取2.0g 干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（ 60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml 和 25％HC1 5ml ，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml 容量瓶中，甲醇定容，经 0.45um 滤膜过滤，供分析用。2）液体样品：准确吸取样品2.0ml ，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后，以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。（2）色谱分离条件色谱柱： CLC－ODS，6mm×150mm，5um; 流动相： 0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V ）＝ 40:80，临用前用超声波脱气；流 速： lml ／min； 柱 温： 40℃； 检测波长： 360nm； 灵敏度： 0.02AUFS ； 进样量： 20ul。（3）样品测定：准确吸取样品处理液和标准液各10ul，注入高液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间定性，以其峰面积计算出样品中总黄酮的含量。4、结果计算（二）分光光度法1．原理 黄酮类化合物是具有苯并吡喃环结构的一类天然化合物的总称，一般都具有4 位羰基，且呈现黄色。黄酮类化合物的3—羟基、 4—羟基或 5—羟基、 4－羰基或邻二位酚羟基，与铝盐进行络合反应，在碱性条件下生成红色的络合物。本方法对样品中黄酮类化合物进行提取纯化后，用分光...
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