总黄酮检验方法A.1.1 原理黄酮类化合物是具苯并芘喃环结构的一类天然化合物的总称，其中的3- 羟基、 4- 羟基或 5- 羟基、 4- 羰基或邻二位酚羟基，可与铝盐进行络合反应，在碱性液体中生成红色络合物， 在一定的浓度范围内， 其浓度与吸光度符合比耳定律。显 齿 蛇 葡 萄 叶 中 的 主 要 活 性 成 分 为 黄 酮 类 化 合 物 中 的 二 氢 杨 梅 素（Dihydromyricetin）, 最大紫外吸收波长为291 nm，可通过制作标准工作曲线和测定样品的吸光度，计算样品中总黄酮含量。A.2 试剂与仪器A.2.1 试剂与溶液5%AlCl3（分析纯）溶液， 95%甲醇溶液。A.2.2 对照品二氢杨梅素。检测方法及纯度：HPLC≥99.0%。A.2.3 分析仪器紫外可见分光光度计。A.3 测定步骤A.3.1 标准工作曲线的制定精密称取二氢杨梅素对照品15.00 mg, 加 95%甲醇溶解并定容至25 ml 。然后精密吸取上述配制的对照品溶液0，0.05 ，0.10 ，0.15 ，0.20 ，0.25 ，0.30分别放置 10ml 容量瓶中， 精密加入 5%AlCl3 溶液 3ml，95%甲醇定容 10ml，摇匀后室温（避光）放置 40min，95%甲醇溶液随行空白 （即 3ml 5%AlCl3 溶液 +7ml 95%甲醇），于 291nm处测定吸光度。所测吸光度与对应的二氢杨梅素浓度绘制成标准工作曲线。A.3.2 供试样品的测定A.3.2.1样品母液的制备：称取 100g 左右的显齿蛇葡萄代用茶产品， 粉碎成 20 目左右的茶粉， 混合均匀。从上述制备的茶粉中，精密称取样品1g，加 95%甲醇 100ml，于 80℃加热回流提取 1h（从甲醇沸腾开始计算时间） ，得醇提取液，放冷，过滤，将滤液移至100ml 容量瓶中，并用 95%甲醇溶液定容至 100ml。A.3.2.2样品母液的稀释精密吸取上述配制的样品母液2.0 ml 分别置 50ml 容量瓶中，用 95%甲醇定容。A.3.2.3稀释后样品母液中总黄酮的测定精密吸取 0.5ml 稀释的样品母液，置于10ml 容量瓶中，精密加入5%AlCl3溶液 3ml，95%甲醇定容，摇匀后室温放置40min（避光放置），试剂空白液（ 3mlAlCl3 溶液+7ml95%甲醇）作参比，于291nm处测定吸光度。A.4 实验结果A.4.1 二氢杨梅素浓度与吸光度的标准曲线（291nm，曲线为示例）X-- 制作标准曲线时标准品稀释液中总黄酮含量（以二氢杨梅素计） /（mg/ml）；Y--291nm Abs A.4.2 待测定样品中总黄酮含量将测定的吸光值（ Y）代入标准曲线中，计算稀释后样品母液中总黄酮的含量（以二氢杨梅素计） / （mg/ml），最终乘以样品稀释倍数50000 倍，得到待测定样品中总黄酮含量（以二氢杨梅素计）/ （mg/g）。
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