- 1 - 2010,高通量测序技术日渐成熟 测序在生命科学研究中一直发挥着重要作用。以Sanger 法(双脱氧核苷酸末端终止法)为代表的第一代测序技术帮助人们完成了从噬菌体基因组到人类基因组图谱等大量测序工作,但由于其存在成本高、速度慢、通量低等不足,并不是后基因组时代最理想的测序方法。 进入 21 世纪后,以Roche 454、Illumina Solexa 和 ABI SOLiD 为代表的第二代测序技术诞生了,并迅速掀起了你追我赶的技术比拼高潮。2010 年,Illunima 和 ABI 先后发布新款测序仪,改进了原有机型,测序通量不断提升,测序成本不断降低,现在已经进入了数千美元测一个人全基因组的时代。 第二代测序技术进展 1. Roche 454 测序技术 454 公司可谓第二代测序技术的奠基者。2005 年底,454 公司推出了革命性的基于焦磷酸测序法的高通量基因组测序系统--Genome Sequencer 20 System。这一技术的建立开创了边合成边测序(sequencing by synthesis)的先河,被 natu re 杂志以里程碑事件报道。之后,454 公司被罗氏诊断公司以1.55 亿美元收购。一年后,他们又推出了性能更优的第二代基因组测序系统--Genome Sequencer FLX System (GS FLX)。2008 年 10 月,Roche 454 在不改变机器的情况下,推出了全新的测序试剂--GS FLX Titanium,全面提升了测序的准确性、读长和测序通量。 目前,Roche 454 GS FLX Titanium 每次运行能产生100 万条序列,平均读长能达到400nt,且第400 个碱基的准确率能达到99%。一次运行所需时间为10 小时,能获得 4-6 亿个碱基的序列信息。 2. Illumina Solexa 测序技术 Illumina 公司的第二代测序仪最早由Solexa 公司研发,利用其专利核心技术"DNA 簇"和"可逆性末端终结(reversible terminator)",实现自动化样本制备和大规模并行测序。Illumina 公司于2007 年初花费 6 亿美金巨资收购了Solexa。2010年初,Illumina 将其第二代测序仪 Genome Analyzer IIx 升级到HiSeq 2000。 HiSeq 2000 含有两张 Flow cell,可同时运行或者只运行其中一张。读长为100nt,同时支持 Fragment、Pair-end 和Mate-Paired 文库。每次运行最多可产生200 GB 的数据量(读长为2x100nt)。 Solexa 测序技术路线: 3. ABI SOLiD 测序技术 过去 20 年,美国应用生物系统公司(ABI)在一代测序方面一直占据着垄断地位。第二代测序技术出现以来,ABI 公司...